多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,kill实验动物,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
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多克隆抗体又简称多抗。与之相对应的叫单克隆抗体,简称单抗。
多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应,单克隆抗体技术服务,制备时间短,成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
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单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的,杂交瘤细胞是由一个经抗原activation后的B细胞与一个marrow 瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点:纯度高,灵敏度高,特异性强,交叉反应少,制备的成本低。缺点:对技术有一定的要求,而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。
经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。
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